RESUMO Fungos fitopatogênicos durante o processo de penetração e colonização são capazes de secretar uma variedade de enzimas, as quais os tornam capazes de infectar o tecido vivo do hospedeiro, atuando na degradação de ceras, cutícula e das paredes celulares. A capacidade de um agente patogênico em produzir ou não enzimas pode determinar o grau de severidade da doença. Foram avaliados 33 isolados de Colletotrichum gloeosporioides relacionados à antracnose e mancha manteigosa do cafeeiro, quanto a sua capacidade de produção de enzimas hidrolíticas (amilase, lipase, protease, lacase, pectinase e celulase) e enzimas específicas degradadoras da parede celular “EDPC” (poligalacturonase, polimetilgalacturonase e pectinaliase), e sua relação com a patogenicidade/agressividade dos isolados. Para todos os isolados de C. gloeosporioides foi possível a detecção de enzimas extracelulares, com exceção de celulases. Os isolados I-9 e I-24 apresentaram os maiores índices de produção de enzimas extracelulares, e assim como de EDPCs. Os mesmos obtiveram os maiores índices de intensidade de doença, sugerindo a relação entre estas e a agressividade dos isolados.

ABSTRACT Phytopathogenic fungi during the penetration and colonization process are capable of secreting several enzymes, which enable infection of the host live tissue, acting on the degradation of wax, cuticle and cell walls. The ability of a pathogenic agent to produce enzymes or not can determine the severity degree of a disease. In this study, 33 isolates of Colletotrichum gloeosporioides related to anthracnose and blister spot on coffee trees were evaluated for their ability to produce hydrolytic enzymes (amylase, lipase, protease, laccase, pectinase and cellulase) and specific cell wall degrading enzymes “CWDEs” (polygalacturonase, polymethylgalacturonase and pectin-lyase), as well as their relationship with the pathogenicity/aggressiveness of isolates. For all isolates of C. gloeosporioides, extracellular enzymes could be detected, except cellulases. Isolates I-9 and I-24 produced the highest levels of extracellular enzymes, as well as CWDEs. They also had the highest disease intensity indexes, suggesting a relationship between enzymes and aggressiveness of the isolates.

Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de fosfitos na proteção do feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris) contra antracnose. Diferentes formulações de fosfitos foram avaliadas por meio da quantificação da atividade de peroxidases e polifenoloxidases, de fenóis totais e do teor de lignina. Os tratamentos consistiram de pulverizações, nos estádios V4, R5 e R7, com: fosfitos de K, Zn, Mn, K+Mn, K+ácido salicílico e Cu; ácido salicílico; acibenzolar-S-metil; o fungicida azoxistrobina; além de um controle, sem aplicações. A área abaixo da curva de progresso da doença foi menor em plantas que receberam aplicações dos fosfitos de K e Mn, cujos valores variaram entre 74 e 81%, em comparação ao controle. Os fosfitos de K, Zn e K+ácido salicílico foram eficazes no controle da doença. Além disso, a severidade da doença foi menor com a aplicação dos fosfitos de K, Zn e Mn quando comparado ao controle. A atividade de enzimas (peroxidases e polifenoloxidases) e os níveis de fenóis solúveis foram mais elevados em plantas de feijão comum tratadas com os fosfitos de K e Mn, embora não tenha sido detectada mudança nos níveis de lignina solúvel no mesmo tecido. A aplicação de fosfitos reduz a severidade da doença, pode potencializar a atividade enzimática e é uma alternativa eficaz para o controle da antracnose no feijoeiro comum.

Abstract: The objective of this work was to evaluate the effect of phosphites in the protection of common bean (Phaseolus vulgaris) against anthracnose. Different phosphite formulations were evaluated by quantifying peroxidase and polyphenol oxidase activity, total phenols, and lignin content. The treatments consisted of sprayings, in the V4, R5, and R7 stages, with: the K, Zn, Mn, K+Mn, K+salicyclic acid, and Cu phosphites; salicylic acid; acibenzolar-S-methyl; the fungicide azoxystrobin; besides a control, without sprayings. The area under the disease progress curve was lower in plants that received applications of the K and Mn phosphites, whose values ranged between 74 and 81%, compared with the control. The K, Zn, and K+salicyilic acid phosphites were effective in controlling the disease. In addition, disease severity was lower with the application of the K, Zn, and Mn phosphites than with the control. Enzyme (peroxidases and polyphenol oxidases) activity and levels of soluble phenols were higher in common bean plants treated with the K and Mn phosphites, although no change was detected in the levels of soluble lignin in the same tissue. Phosphite application reduces the severity of the disease, can enhance enzymatic activity, and is an effective alternative for the control of anthracnose in common bean.

Colletotrichum gloeosporioides no Brasil está associado a um complexo de sintomas na cultura do café. Apesar da observação e da identificação da patogenicidade deste, o patógeno ainda tem sua importância questionada, devido às várias formas endofíticas do mesmo, levantando dúvidas sobre a real importância do patossistema. O presente trabalho teve como objetivo demonstrar por meio da utilização de um isolado transformado com o gene gfp a capacidade de infecção e colonização de C. gloeosporioides em plântulas de café. Pode-se observar após o quarto dia da inoculação a exteriorização de sintomas como necrose pontuais as quais progrediram durante o período de avaliação, culminando na morte das plântulas. Por meio de microscopia de epifluorescencia pode-se confirmar a presença do patógeno nas plântulas, assim como visualizar a colonização interna do tecido, a formação de acérvulos e produção de conídios, confirmando que o mesmo foi o responsável pelos sintomas observados.

In Brazil, Colletotrichum gloeosporioides is associated with a complex of symptoms in coffee culture. Although this pathogen had its pathogenesis observed and identified, its importance has still been questioned due to its several endophytic forms, raising doubts as to the real importance of the pathosystem. The aim of this study was to demonstrate, by using an isolate transformed with the gene gfp, the infection and colonization capability of C. gloeosporioides in coffee seedlings. After the fourth day of inoculation, manifestation of symptoms as punctual necrosis could be observed, which progressed during the evaluation period, culminating in the death of seedlings. Epifluorescence microscopy confirmed the presence of the pathogen in the seedlings, as well as the visualization of internal colonization of tissues, acervulus formation and conidium production, confirming that it was responsible for the observed symptoms.

Blister spot (Colletotrichum gloeosporioides) is now widespread in most coffee producing states of Brazil, becoming a limiting factor for production. The lack of data relating to the reproduction of typical symptoms (light green, oily patches) leaves a gap within the pathosystem, forcing the search for new methodologies for monitoring the disease. Monitoring of genetically modified organisms has proven to be an effective tool in understanding the host x pathogen interactions. Thus, the present study was carried out to evaluate the effectiveness of two systems of genetic transformation in obtaining mutants using the gfp reporter gene. Using the two transformation systems (PEG and electroporation) revealed the efficiency of both, confirmed by fluorescence microscopy and resistance to the antibiotic hygromycin-B, when incorporated into the culture medium. The fungus maintained its cultural and morphological characteristics when compared to wild strains. When inoculated on coffee seedlings, it was found that the pathogenicity of the processed isolates had not changed.

Foi avaliada a influência de Colletotrichum. gloeosporioides na sanidade, germinação, viabilidade e vigor de sementes de cafeeiro. Sementes das cultivares Catuaí Vermelho, provenientes de plantas com sintomas de mancha manteigosa, e de lavouras sadias de Catuaí Vermelho IAC 44 e Mundo Novo 379-19 foram submetidas a inoculação por C. gloeosporioides, pelo contato direto com a colônia do fungo, por 0; 24; 48; 72; 96 e 120 horas. As variáveis analisadas foram sanidade, germinação, índice de velocidade de emergência e viabilidade pelo teste de tetrazólio. Verificou-se aumento da incidência de C. gloeosporioides com o do tempo de exposição ao fungo, sendo esta de 26% em Catuaí Vermelho, 21,5% em Catuaí Vermelho IAC-44 (21,5%) e de 11,0% em Mundo Novo IAC 379-19. O fungo afetou a germinação das sementes e o índice de velocidade de emergência das sementes da cultivar Catuaí Vermelho e Catuaí Vermelho IAC 44 a partir de 96 horas de exposição. O efeito de C. gloeosporioides na germinação e no estabelecimento de plântulas de cafeeiro é variável, dependendo da cultivar utilizada, da presença do pergaminho e do tempo de exposição ao fungo, mas a viabilidade das sementes decresce com o aumento do tempo de exposição ao fungo.

The objective of this study was to evaluate the influence of Colletotrichum gloeosporioides on the seed health, germination, viability and vigor of different coffee cultivars. Seeds of the Catuaí Vermelho cultivar, with symptoms of blister spot, and of healthy cultivars of Catuaí Vermelho IAC 44 and Mundo Novo 379-19 were inoculated with C. gloeosporioides, by direct contact with the fungus colony for 0; 24; 48; 72; 96 and 120 hours. The variables analyzed were: health with the Blotter test, germination, speed of emergence and seed viability by tetrazolium test. There was an increased incidence of C. gloeosporioides with increasing exposure to the fungus, with 26.0% in Catuaí Vermelho, 21.5% in Catuaí IAC-44 (21.5%) and 11.0% in Mundo Novo IAC 379-19. C. gloeosporioides affected the germination and seed emergence rate of Catuaí Vermelho and Catuaí Vermelho IAC 44 after 96 hours of exposure to the fungus. The effect of C. gloeosporioides on coffee germination and seedling establishment varies with cultivar susceptibility, the presence of parchment and time of exposure to the fungus, but viability decreases with increasing exposure time to the fungus.

Verificou-se a influência dos fungos associados aos frutos de café na composição físico-química e química do grão beneficiado de Coffea arabica L. Os frutos foram colhidos na fazenda Experimental da EPAMIG, no município de Lavras-MG. Após beneficiamento e secagem, os grãos foram incubados em câmara úmida para exteriorização dos fungos através do método blotter test e submetidos às análises de polifenoloxidase, açúcares totais redutores e não redutores, ácido clorogênico, acidez titulável, lixiviação de potássio, condutividade elétrica e cafeína. Verificou-se a ocorrência dos fungos Penicillium variable, P. rugulosum, P. funiculosum, Fusarium semitectum, F.equiseti, Aspergillus alutaceus, A. niger, Cladosporium cladosporioides. Pela análise dos resultados obtidos observou-se que a presença do fungo Aspergillus alutaceus reduz a atividade da enzima polifenoloxidase e aumenta os valores de lixiviação de potássio, condutividade elétrica e fenólicos totais. A incidência do fungo Cladosporium cladosporioides influenciou nos valores médios de lixiviação de potássio e condutividade elétrica.

The influence of fungi associated with coffee fruits was verified regarding the chemical and physicochemical composition of Coffea arabica L. raw grains. The fruits were harvested at EPAMIG Experimental farm in Lavras, State of Minas Gerais - making up the different samples here analyzed. After processing and drying, the grains were incubated in wet chamber for fungal exteriorization through the blotter test method and submitted to the following analyses: polyphenoloxidase, total reducing and non-reducing sugars, clorogenic acid, titrable acidity, potassium leaching, electric conductivity and caffeine. The occurrence of the P. variable, P. rugulosum, P. funiculosum, F. equiseti, F. semitectum, A.alutaceus, A. niger and C. cladosporioides fungi in the different samples was detected. From the analysis of the results obtained, it was observed that the presence of the Aspergillus alutaceus fungus reduces the activity of the enzyme polyphenoloxidase and increases the values of potassium leaching, electric conductivity and chlorogenic acid. The incidence of the Cladosporium cladosporioides fungus influenced the average values of potassium leaching and electric conductivity.

O objetivo deste trabalho foi verificar a micota associada interna e externamente a grãos de café nas cultivares: Catuaí Amarelo, Mundo Novo, Acaiá, Rubi e Icatú, e detectar a ocorrência de Ocratoxina A nestas amostras. Frutos de café foram colhidos na Fazenda Experimental da EPAMIG, situada no município de Lavras/MG. O procedimento para análise de fungos filamentosos foi o método Blotter test. A determinação da ocratoxina A foi realizada por CLAE. Fusarium semitectum foi identificado apenas na cultivar Icatu e F. equiseti foi detectado em todas as cultivares, exceto na Mundo Novo. Três espécies de Penicilium foram isoladas dos grãos: P. rugulosum na cultivar Rubi, P. funiculosum na cultivar Icatu e P. variabile nas demais. A cultivar Acaiá apresentou maior incidência de P. variabile, seguida por Mundo Novo e Catuaí. A ocorrência de A. niger e A. ochraceus não diferiu entre as cultivares. A presença de fungos na superfície dos grãos foi significativamente superior ao encontrado internamente. Em nenhuma amostra foi detectada a ocorrência de ocratoxina A.

The aim of this work was to verify the mycobiota associated both internally and externally with coffee beans on the cultivars "Catuai Amarelo", "Mundo Novo", "Acaiá," "Rubi" and "Icatú" and detect the occurrence of ochratoxin A in these samples. Coffee fruits were harvested on the EPAMIG experiment farm, situated in Lavras /Minas Gerais. The procedure for fungi analysis was the Blotter test. Determination of ochratoxin A was accomplished by HPLC. Fusarium semitectum was identified only on the Icatu cultivar and F. equiseti was identified on all cultivars except Mundo Novo. Three species of Penicillium were isolated from the beans: P. rugulosum on the Rubi cultivar, P. funiculosum on the Icatu cultivar and P. variabile on the others. The Acaiá cultivar had the highest incidence of P. variabile followed by Mundo Novo and Catuaí. The occurrence of A. niger and A. ochraceus did not differ among the cultivars.The presence of fungi on the surface was significantly higher than inside the beans. None of the samples presented ochratoxin A.

A mancha manteigosa tem afetado um grande número de plantas de cafeeiro em condições de campo. Sua causa tem sido atribuída a Colletotrichum gloeosporioides, entretanto a sintomatologia da doença na folha não tem sido reproduzida. Neste estudo, relata-se pela primeira vez a associação de Xylella fastidiosa, agente da atrofia dos ramos de cafeeiro, com pecíolo de folhas e hipocótilos obtidos a partir de sementes de plantas com sintomas da mancha manteigosa, através de estudos ultra-estruturais em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV), bem como por PCR (Polymerase Chain Reaction). Para o estudo foram realizados três ensaios. No primeiro, coletaram-se folhas com sintomas de mancha manteigosa e assintomáticas em duas localidades as quais foram preparadas para MEV. No segundo, pecíolos de 40 plantas sintomáticas e 40 assintomáticas foram coletados no campo experimental de café da UFLA. Os Pecíolos das folhas foram cortados e macerados para extração do DNA e analisados por PCR. Quatro pecíolos de cada uma destas amostras (plantas com e sem sintomas) também foram preparados para MEV. Em um terceiro ensaio, sementes obtidas de plantas com sintomas de mancha manteigosa, foram semeadas em bandejas de isopor contendo substrato Plantmax®. As bandejas permaneceram em câmara de crescimento e aos 30, 60 e 90 dias, após a semeadura, foram coletados hipocótilos para preparação e observação em MEV. Inicialmente uma bactéria semelhante à Xylella foi encontrada nos vasos do xilema de plantas sintomáticas das duas localidades estudadas. Pela análise por PCR constatou-se X. fastidiosa em 34% das plantas com sintoma da doença e 9,3% nas sem o sintoma da mancha manteigosa. Pecíolos de plantas Xylella positivas por PCR apresentaram obstrução dos vasos do xilema pelas bactérias. Das quatro plantas negativas por PCR, apenas uma teve o pecíolo com vasos obstruídos pela bactéria quando analisados em MEV. Em hipocótilos analisados em MEV verificaram-se células bacterianas semelhantes à X. fastidiosa nos vasos do xilema aos 60 e 90 dias após semeadura. Esse é o primeiro relato da associação de X. fastidiosa a pecíolos e hipocótilos de cafeeiros expressando sintomas de mancha manteigosa.

Buttery spot has greatly affected coffee plants in field conditions. Its cause has been attributed to Colletotrichum gloeosporioides. However, its symptoms in leaves have not been reproduced. In this study we reported for the first time the presence of X. fastidiosa, causal agent of the coffee atrophy in petiole and hypocotyls from coffee plants with buttery spot through PCR and ultrastructural studies by scanning electron microscopy (SEM). In this study three trials were developed. In the first we collected leaves from plant with and without buttery spot symptoms in two places which were prepared for SEM. In the second petioles of 40 symptomatic and 40 asymptomatic leaves were collected in a coffee experimental field of Federal University of Lavras. Petiole from these leaves were cut and macerated for DNA extraction and analyzed by PCR. Four petioles of each sample (plants with and without symptoms) were prepared for SEM. In a third trial, seeds from plants with battery spot were sowed in foam trays with Plantimax® substrate. The trays stayed in a growth chamber and after 30, 60 and 90 days of the germination hypocotyls were collected for preparation and observation in SEM. Initially a bacterium similar to X. fastidiosa was found in vessels of symptomatic plants studied. Through the analysis by PCR we verified X. fastidiosa in 34% of plants with the disease symptoms and 9,3% in those without symptom of buttery spot. Petioles of positives Xylella plants by PCR presented obstruction of vessels of xylem by bacteria. Out of four PCR-negatives plants, one had petioles with vessels clogged by bacteria when analyzed by SEM. In analyzed hypocotyls with SEM were observed bacterial cells like X. fastidiosa in xylem vessels at 60 and 90 days. This is the first report of the colonization of X. fastidiosa in coffee plant petiole and hypocotyls of seeds of plants expressed buttery spot symptoms.

Objetivou-se avaliar o efeito de filtrados derivados de culturas de rizobactérias na inibição da germinação de esporos de Colletotrichum gloeosporioides e confirmar sua ação antifúngica em relação à mancha manteigosa em mudas de cafeeiro. Foram conduzidos ensaios in vitro para testar 42 filtrados, identificando-se os de maior capacidade de inibir a germinação de esporos do fungo. Plântulas de café foram submetidas à inoculação com Colletotrichum e pulverização com quatro dos filtrados mais promissores. Os tratamentos constituíram um fatorial 4x4+2, combinando a aplicação de quatro filtrados com quatro modos de inoculação do fungo (ausência de inoculação e inoculação dois dias antes, junto, ou dois dias depois da aplicação dos filtrados). Uma testemunha absoluta e outra que recebeu somente o inóculo do fungo constituíram tratamentos adicionais. Após 35 dias, foram avaliados o crescimento do cafeeiro e a severidade da mancha manteigosa. Os filtrados apresentaram ampla variação quanto à atividade antifúngica in vitro e cinco deles inibiram completamente a germinação dos esporos. No experimento com planta, os filtrados tiveram eficácia similar contra a mancha manteigosa, com controle parcial da doença (35%). A aplicação dos filtrados teve efeito depressivo ao crescimento do cafeeiro, proporcionando menor produção de matéria seca em relação à testemunha absoluta.

The objective of this study was to evaluate the effect of rhizobacteria metabolites on Colletotrichum gloeosporioides spores germination and to confirm their antifungic activity against the buttery spot disease in coffee seedlings. In vitro bioassays, carried out with 42 rhizobacteria filtrates, allowed the identification of filtrates able to completely inhibit the spore germination. Coffee seedlings were inoculated with Colletotrichum and sprayed with four of the most promising filtrates. The treatments were organized in a 4x4+2 factorial scheme, combining the application of the four filtrates with four procedures of Colletotrichum inoculation (inoculation absence, inoculation two days before, together, or two days after the filtrates application). A check treatment (1) without filtrate or pathogen and other check (2) that received only the pathogen inoculation constituted the additional treatments. After 35 days, the vegetative growth of the seedlings and the severity of the buttery spot were assessed. All four filtrates showed similar effectiveness in the control of the buttery spot. The disease control was partial (35%). The filtrates application was harmful to coffee growth, providing less dry matter production in relation to the check treatment (1).

Situada no sul de Minas Gerais, principal região cafeeira do país, a Clínica Fitossanitária da Universidade Federal de Lavras tem auxiliado os produtores, dando suporte na diagnose de doenças de origem biótica e abiótica, de modo a gerar subsídios para minimizar as perdas na produção. Nos últimos doze anos, foram analisadas 378 amostras de café. Em 78,6% das amostras, foram detectados fungos, destacando-se Colletotrichum sp. (29%), Rhizoctonia solani (18%), Cercospora coffeicola (13%), Phoma sp. (13%) e Fusarium sp (11%). Ocorreram ainda em números representativos casos de fitotoxidez, deficiência de nutrientes e problemas no sistema radicular. Devido à localização da Clínica, a maior parte das amostras foi proveniente de localidades na região sul do Estado (63%), seguido do Triângulo Mineiro (12%) e Zona da Mata (10%).

The Phytossanitary Clinic of the Federal University of Lavras, situated in the south of the State of Minas Gerais has given support to coffee producers providing diagnoses of biotic and abiotic diseases, to generate subsidies to minimize losses in production of this crop. During the last twelve years, 378 samples have been analyzed. Fungi were detected in 78,6% of the samples. The major fungi found were Colletotrichum sp. (29%), Rhizoctonia solani (18%), Cercospora coffeicola (13%), Phoma sp. (13%), e Fusarium sp (11%). Other incidences were caused by phytotoxity, mineral deficiency and bad formation of the roots. Due to the location of the Phytossanitary Clinic, most of the samples came from locations of South of Minas Gerais (63%), followed by Triângulo Mineiro (12%) and Zona da Mata (10%).

Com o presente trabalho objetivou-se analisar os diagnósticos realizados na Clínica Fitossanitária do Departamento de Fitopatologia da Universidade Federal de Lavras, no período de 1990 a 1999. Foram analisadas 85 espécies de hospedeiros, num total de 1429 amostras. Os fungos, com 70,5%, as bactérias, com 12,9% e as viroses, com 1,2%, foram os agentes etiológicos de doenças bióticas encontrados com maior freqüência. A deficiência nutricional e a fitotoxidez representaram 15,4%. O fungo de maior ocorrência foi o gênero Fusarium, associado a 25,5% das doenças, seguido de Colletotrichum (16%), Rhizoctonia (11%), Alternaria (5%), Cercospora (4%), espécies do grupo Helminthosporium (4%) e Phoma (3,5%). Os demais gêneros de fungos representaram 32% das amostras. Entre os agentes etiológicos bacterianos, destacou-se o gênero Erwinia, com 35% das amostras, seguida pelos gêneros Streptomyces (30%), Ralstonia (13,5%), Pseudomonas (11,5%), Xanthomonas (9,5%) e Agrobacterium (0,5%). As manchas foliares foram os sintomas de maior ocorrência, encontrados em 40% das amostras recebidas, seguidas das murchas (22%), cancros e sarnas (17%), podridões (14%) e tombamento (3%). Outros sintomas totalizaram 4% das amostras recebidas. Entre os hospedeiros, as hortaliças destacaram-se com 27% das ocorrências, os grãos, com 24%, as frutíferas tropicais, com 17%, as ornamentais, com 15%, as frutíferas temperadas, com 3%, forrageiras, com 2%, oleaginosas, com 2% e outros, com 10%.

This work had as objective analyzes the diagnoses accomplished at the Plant Disease Clinic of the Plant Pathology Department at the Federal University of Lavras, between 1990 to 1999. Eighty five hosts were analyzed, in 1429 samples. The fungus with 70.5%, the bacteria with 12.9% and the viroses with 1.2% were the etiologic agents found more frequently. The fungi etiologic agent of larger occurrence was the genera Fusarium associated to 25.5% of the diseases, followed by Colletotrichum (16%), Rhizoctonia (11%), Alternaria (5%), Cercospora (4%), Helminthosporium (3.5%) and Phoma (3%), the other fungi agents represented 31% of the samples. The bacterial etiologic agent of larger occurrence was the Erwinia genera with 35% of samples, followed to genera Streptomyces (30%), Ralstonia (13,5%), Pseudomonas (11.5%), Xanthomonas (9.5%) and Agrobacterium (0.5%). The leaves spots were the symptoms of larger occurrence, with 40% of the samples, followed by wilts (22%), cankers and scab (17%), rots (14%) and damping-of (3%). Concernings the hosts, the vegetables stood out with 27% of the occurrences, the grains with 24%, the tropical fruits with 17%, the ornamental ones with 15%, the temperate fruits with 3%, forage with 2%, oleaginous with 2% and other with 10%.